内容简介
《基因克隆与操作（原书第2版）》作者克里斯托弗·豪是剑桥大学植物与微生物生物化学专业的教授，教授分子生物学达20年。《基因克隆与操作（原书第2版）》是对第一版的完全更新，反映了基因克隆和操作领域新的进展，对重组DNA技术进行了全面而简洁的介绍：首先阐释了生物化学的基本原理；然后介绍了PCR以及使用大肠杆菌宿主和质粒、噬菌体和杂合载体进行克隆；之后介绍了文库的构建和筛选，以及如何对克隆化序列进行改造、灭活和表达；最后讨论了在许多其他生物中进行的遗传操作，包括细菌、真菌、藻类，以及植物、昆虫和哺乳动物。《基因克隆与操作（原书第2版）》是为要使用重组DNA技术的高年级本科生、研究生和科研工作者而作，重点放在特定类型克隆载体上，以帮助读者理解并能够在新的实验状态下提出适当的策略。《基因克隆与操作（原书第2版）》还介绍了一系列“现实的”生物学问题，以使读者能够评估自己对知识的理解并准备考试。
精彩书摘
从凝胶中回收材料（通常是DNA）通常很有用，当要从一种消化物中克隆一个特定的限制酶切片段时，需要使用凝胶将目标片段与其他DNA分开，然后从凝胶中回收用于克隆的片段。回收方法有以下几种，目前第一种方法是最常用的。1.溶解或消化凝胶。如果凝胶是用低熔点琼脂糖制成的，那么我们只需要切下含有目标DNA的胶条，通过加热熔化凝胶介质即可。用促溶剂处理或用琼脂水解酶消化能够溶解熔点较高的凝胶。一旦凝胶被溶解，就可以通过适当的溶剂提取或使用硅石纯化来回收DNA。2.扩散。从凝胶上切下含有待回收DNA的胶条，将其碾碎，在缓冲液中浸泡几个小时，则大多数的DNA从凝胶中扩散出来，然后用过滤或离心的方法除去凝胶。3.冷冻一挤压（freeze_squeeze）。从凝胶上切下含有DNA的胶条，在液氮中冷冻，这样可以破坏凝胶的结构，然后离心通过玻璃棉填料，填料阻止凝胶通过，但能够使液体（含有溶解的DNA）通过。4.电洗脱。有几种涉及电洗脱的技术，这里列举三种。a.从凝胶上切下胶条，密封到含有缓冲液的透析袋中，继续进行电泳，DNA离开凝胶，但被截留在透析袋内的缓冲液中。b.在紧挨着目标DNA下方的凝胶上切一个槽，充入缓冲液，继续电泳，DNA从凝胶中出来，进入含有缓冲液的槽中，可以用移液器从槽内取出DNA。c.将一片适当的膜插入紧挨着DNA的凝胶中，继续电泳，DNA粘到膜上，取出膜，用适当的溶液洗下DNA。DEAE纤维素膜就是一种合适的膜，用高盐缓冲液洗涤可以从该膜上洗下DNA。<br> ……
目录
译者序<br>第二版 前言<br>第一版 前言<br>第1章 工具<br>1.1 前言<br>1.2 切割<br>1.3 修饰<br>1.4 连接<br>1.5 转化<br>1.6 从大肠杆菌中纯化质粒DNA<br>1.7 核酸的凝胶电泳<br>1.8 寡核苷酸合成<br>1.9 微阵列<br>第2章 聚合酶链反应<br>2.1 基本技术<br>2.2 预防措施和缺点<br>2.3 改良<br>第3章 简单克隆<br>3.1 基本实验<br>3.2 载体、转化和宿主<br>3.3 修饰<br>3.4 接头、衔接子和序列盒<br>第4章 用于大肠杆菌的其他载体系统<br>4.1 前言<br>4.2 BAC载体<br>4.3 M13噬菌体载体<br>4.4 入噬菌体<br>4.5 黏粒<br>4.6 Mu噬菌体<br>4.7 P1噬菌体<br>第5章 文库构建<br>5.1 前言<br>5.2 基因组文库<br>5.3 cDNA文库<br>5.4 专业文库<br>第6章 文库筛选<br>6.1 前言<br>6.2 数据库筛选<br>6.3 编码功能的实验筛选<br>6.4 其他功能的筛选：报告基因<br>第7章 改造与诱变<br>7.1 前言<br>7.2 基于限制性内切核酸酶的方法<br>7.3 寡核苷酸定向诱变<br>7.4 选择正确的突变<br>7.5 灭活基因<br>第8章 克隆化DNA的应用<br>8.1 作为DNA使用<br>8.2 RNA的合成<br>8.3 蛋白质的合成<br>8.4 体外翻译<br>8.5 体内表达<br>8.6 研究基因功能：报告基因和标签<br>第9章 使用其他生物<br>9.1 前言<br>9.2 细菌<br>9.3 酿酒酵母<br>9.4 其他真菌<br>9.5 藻类<br>9.6 维管植物<br>9.7 细胞器转化<br>9.8 秀丽隐杆线虫<br>9.9 昆虫<br>9.10 哺乳动物<br>第10章实例<br>10.1 前言<br>参考文献<br>索引
试读
从凝胶中回收材料（通常是DNA）通常很有用，当要从一种消化物中克隆一个特定的限制酶切片段时，需要使用凝胶将目标片段与其他DNA分开，然后从凝胶中回收用于克隆的片段。回收方法有以下几种，目前第一种方法是最常用的。1.溶解或消化凝胶。如果凝胶是用低熔点琼脂糖制成的，那么我们只需要切下含有目标DNA的胶条，通过加热熔化凝胶介质即可。用促溶剂处理或用琼脂水解酶消化能够溶解熔点较高的凝胶。一旦凝胶被溶解，就可以通过适当的溶剂提取或使用硅石纯化来回收DNA。2.扩散。从凝胶上切下含有待回收DNA的胶条，将其碾碎，在缓冲液中浸泡几个小时，则大多数的DNA从凝胶中扩散出来，然后用过滤或离心的方法除去凝胶。3.冷冻一挤压（freeze_squeeze）。从凝胶上切下含有DNA的胶条，在液氮中冷冻，这样可以破坏凝胶的结构，然后离心通过玻璃棉填料，填料阻止凝胶通过，但能够使液体（含有溶解的DNA）通过。4.电洗脱。有几种涉及电洗脱的技术，这里列举三种。a.从凝胶上切下胶条，密封到含有缓冲液的透析袋中，继续进行电泳，DNA离开凝胶，但被截留在透析袋内的缓冲液中。b.在紧挨着目标DNA下方的凝胶上切一个槽，充入缓冲液，继续电泳，DNA从凝胶中出来，进入含有缓冲液的槽中，可以用移液器从槽内取出DNA。c.将一片适当的膜插入紧挨着DNA的凝胶中，继续电泳，DNA粘到膜上，取出膜，用适当的溶液洗下DNA。DEAE纤维素膜就是一种合适的膜，用高盐缓冲液洗涤可以从该膜上洗下DNA。<br> ……
前言/序言
自本书第一版出版以来，基因克隆和操作的领域已发生了很大的变化，我在第二版中进行的修订反映了这种进展。PCR方法的应用已得到了极大的发展，在许多生物中都可以用到“组学”和反向遗传学的技术，一些成熟的领域也取得了很大的进步，如用于表达蛋白质的宿主和载体，以及使用荧光蛋白作为报告基因。像在第一版中那样，我已尽量强调有关我们所用载体的基本原理，并尽量避免使用长长的、详细的列表（从任何角度来看，这些列表都很快就会过时）。由于认识到了设计针对各种实验状态的适当策略的必要性，我增加了最后一章，给出了一些实例和建议。感谢我实验室的成员，当为了完成此版本（我的众所周知的“兴趣巨著”）而不得不推迟其他工作时，他们耐心地等待。我要特别感谢那些以各种方式给予直接帮助的人，特别是Mim Bower、Jon Burton、Ellen Nisbet、Saul。Purton、Beatrix Schlarb-Ridley和Petrusde Vries。我也要感谢剑桥大学出版社的KatrinaI-Ialliday和Clare Georgy，以及Keyword集团的Peter Lewis和Rasika Mathur，感谢他们的技术专长、耐心和鼓励。
